【摘要】目的　探讨口服海洋鱼皮胶原肽对人体皮肤水份和面部黄褐斑的影响。方法　选择年龄在30～65 岁、皮肤水份≤12者100名和年龄在18～65岁、面部有黄褐斑者100名，分别随机分为试验组和对照组（各50名），进行改善皮肤水份试验、祛黄褐斑试验。受试者每天摄入海洋鱼皮胶原肽2.7g，连续30d。在试验前后分别测定皮肤水份、面部黄褐斑的面积和颜色，调查受试者疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等不适症状的变化，测定血常规、大小便常规和血液生化指标。 结果　皮肤干燥者口服海洋鱼皮胶原肽后，皮肤水份由（7.48±2.39）增加至（8.68±3.15），得到明显改善（P＜0.05），与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.01）；而对皮肤的油份和pH值没有影响（P＞0.05）。面部有黄褐斑者口服海洋鱼皮胶原肽后，黄褐斑的色卡值平均降低（0.35±0.38）度，黄褐斑的面积平均缩小（4.70±8.01）cm2。与试验前比较，两项指标均有明显变化（P＜0.01）；与对照组相比，两项指标差异有统计学意义（P＜0.05）。两组试验中，受试者疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等不适症状均有明显改善；血常规、大小便常规和血液生化检查结果均无明显异常，亦未见过敏反应。

    【结论】 口服海洋鱼皮胶原肽能够改善皮肤水份和祛面部黄褐斑，并有助于改善疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等不适症状。

 

    【关键词】 海洋鱼皮胶原肽；皮肤水份；黄褐斑

   

       皮肤是人体最大的器官，具有免除或减轻机体外来刺激的作用。由于机体不断受到内源性和外源性多种因素的共同作用，人的整个身体也会产生一系列的变化，在皮肤上表现为皮肤干燥、粗糙，失去光泽和弹性，出现皱纹、皱裂、黄褐斑等现象。皮肤包括表皮层和真皮层，真皮层包含大量的细胞外基质，其主要成分是由纤维原细胞合成的胶原和黏多糖。胶原是人体内含量最丰富的蛋白质，约占机体蛋白质总量的3%。胶原蛋白含量和胶原纤维束的直径大小，是决定皮肤质地及性状的重要因素。

 

       海洋鱼皮胶原肽是利用酶解生物工程技术从深海鱼皮中提取的小分子胶原肽，主要由2～6个氨基酸组成，相对分子质量主要集中在300～860。研究表明，海洋鱼皮胶原肽能够有效延缓D-半乳糖所致的皮肤老化。本研究旨在通过人体试验，了解海洋鱼皮胶原肽对人体皮肤水份改善和祛黄褐斑的作用效果，为海洋鱼皮胶原肽在维持人体皮肤健康方面的应用提供参考依据。

 

       1　资料与方法

 

       1.1　一般资料

 

       选择年龄在30～65岁、皮肤水份≤12者，共100人（其中女98人，男2人），作为海洋鱼皮胶原肽对皮肤水份影响的观察对象；选择年龄在18～65岁、面部有黄褐斑的女性100人，作为海洋鱼皮胶原肽对皮肤黄褐斑影响的观察对象。

 

       排除标准如下：① 妊娠或哺乳期妇女；② 合并有心脑血管、肝、肾、造血系统性疾病和精神病史者；③ 短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者；④ 未按试验要求服用受试样品，无法判定功效或资料不全影响疗效或安全性判断者。所有受试对象均本着知情同意的原则，并经中国中医研究院伦理委员会审批通过。

 

       1.2　试验制剂

 

       本研究使用的海洋鱼皮胶原肽由北京中食海氏生物技术有限公司提供，是以深海鲑鱼的鱼皮为原料，经过清洗、复合偶联酶解、酶失活、脱脂、多级膜分离、渗透浓缩、脱色、干燥等工艺制备而成。

 

       1.3　主要仪器和试剂

 

       SHP88皮肤分析仪（德国Courage+Khazaka公司）；MEK-6318K 型血球计数仪（日本，光电工业株式会社）；MIDIRON 尿十项分析仪（德国，宝灵曼公司）；RA1000 全自动生化分析仪（美国，泰而康公司）；棕色色卡参照《实用标准色卡》（第1版），系由中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社 1992 年出版；生化试剂盒全部由中生北控生物科技股份有限公司提供。

 

       1.4　试验设计与对象分组

 

       改善皮肤水份试验和祛黄褐斑试验均采用自身和组间两种对照设计，根据皮肤水份试验和面部黄褐斑试验的情况，均分别将选择的100名观察对象按照完全随机设计的方法分为试验组和对照组（每组各50名）。试验组每人均口服海洋鱼皮胶原肽2.7 g/d，时间为30 d。对照组为空白对照。受试者在试验期间停止使用与试验目的有关的药物或保健食品及化妆品。

 

       1.5　观察指标及其判定

 

       1.5.1 安全性指标　① 红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白、尿常规、大便常规检查；② 生化指标测定，包括血清白蛋白、总蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素、肌酐、血糖、总胆固醇、甘油三酯；③ 腹部B 型超声、心电图、X 线胸部检查；④ 过敏及不良反应观察。

 

       1.5.2 功能性指标　① 一般状况指标：精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。详细询问病史，了解受试者饮食情况，观察主要临床症状（疲劳感、烦躁、睡眠等）。按症状轻重（重症3分、中度2分、轻症1分）在试验前后统计积分值，并就其主要症状改善（每一症状改善2分显效，改善1分为有效），计算改善率；② 皮肤水份含量：选择前额眉间皮肤为测定部位。在安静状态下用洁净棉球蘸蒸馏水清洁被测部位，擦干后15 min进行水份的测定，试验前后测定工作由同一台仪器、同一人操作。全部操作在宽敞、通风条件良好，温度、湿度等空间环境稳定的检查室内进行；③ 面部黄褐斑面积：用标尺测量受试前后同一黄褐斑的长径（cm）和宽径（cm），计算面积（cm2）；④ 面部黄褐斑颜色：按照“实用标准色卡”中的棕色（Y+M+BK，即黄+品红 +黑的叠色）色卡为黄褐斑颜色深浅的判断标准：Ⅰ度（15、20、5），Ⅱ度（30、40、10），Ⅲ度（40、60、15）。

 

       1.5.3　祛黄褐斑功效判定　有效：黄褐斑颜色下降Ⅰ度或面积缩小≥10%，不产生新的黄褐斑；无效：黄褐斑面积缩小＜10%，颜色无明显变化。

 

       1.6　统计学方法

 

       采用STATE6.0 统计软件计算分析数据。自身对照资料的比较采用配对t检验，两组均数比较先进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态分布、方差齐性后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态分布、方差齐性要求，改用t´检验或秩和检验；但变异系数（CV）太大（如 CV ＞ 50%）的资料采用秩和检验；功效指标的比较采用χ2检验。P值＜0.05为有统计学意义。

 

       2　结果

 

       2.1　海洋鱼皮胶原肽改善皮肤水份试验

 

       2.1.1　受试者一般状况　试验组与对照组受试者的年龄分别为（49.02±10.28）、（48.78±7.72）岁，病程分别为（4.80±3.85）、（5.28±3.16）年，两组差异均无统计学意义（P＞0.05）。观察对象在饮食、睡眠、大小便、精神状态、血压等方面基本正常。

 

       2.1.2　海洋鱼皮胶原肽对皮肤水份和油份的影响　试验前，试验组和对照组的皮肤水份分别为7.48 ± 2.39、6.94 ± 1.74，两组差异无统计学意义（P＞0.05）。受试

者口服海洋鱼皮胶原肽后，皮肤水份由7.48 ± 2.39增加至 8.68 ± 3.15，对照组试验前后的水份分别为 6.94 ± 1.74 和 7.08 ± 1.76。对照组试验前后的水份差异无统计学意义（P ＞ 0.05），观察组的皮肤水份在试验后得到明显改善（P ＜ 0.05），与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.01），而试验组和对照组的皮肤油份、pH值两项指标在试验前后均无明显变化（P＞0.05），见表1。

 

 

       2.1.3　海洋鱼皮胶原肽对不适症状的影响　口服海洋鱼皮胶原肽，对受试者的疲劳感、烦躁、睡眠、干涩等症状有改善作用，与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

 

 

       2.2　海洋鱼皮胶原肽祛黄褐斑试验

 

       2.2.1　受试者一般情况　试验组与对照组年龄分别为(45.22 ± 10.08)、(45.40 ± 12.17)岁，病程分别为(4.62 ± 3.01)（、4.66 ± 3.50）年，差异均无统计学意义（P＞0.05）。受试者精神状态、睡眠、饮食、大小便、血压均属基本正常。

 

       2.2.2　海洋鱼皮胶原肽对黄褐斑颜色和面积的影响试验前，试验组与对照组的黄褐斑色卡值和黄褐斑面积差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。试验组试验前后黄褐斑的颜色和面积差异均有统计学意义，试验后试验组与对照组黄褐斑的颜色和面积差异均有统计学意义，见表 3、4。按照试验的有效性判定原则，口服海洋鱼皮胶原肽，27 名有效，总有效率达 54%，而对照组只有 1 名有效，两组差异具有统计学意义（χ2=33.532，P=0.000）。

 

 

 

       2.2.3　试验前后不适症状变化情况　口服海洋鱼皮胶原肽，对黄褐斑受试者的疲劳感、烦躁、睡眠等症状均有改善作用，并且试验组和对照组的上述 3 种不适症状的总有效率差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05），见表 5。

 

 

       在试验前、试验中期、试验后期，根据症状积分原则判断和计算两组的症状积分，试验组和对照组在试验中、后期的积分与试验前的积分差异均有统计学意义（P＜0.05），见表6。

 

 

       2.3　海洋鱼皮胶原肽对血液生化指标和血、大小便常规的影响在改善皮肤水份试验和祛黄褐斑试验中，均对受试者的血清总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血糖、总胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素、血红蛋白、红细胞、白细胞、大、小便常规等项指标进行检测，观察组与对照组在试验前、后各项指标均在正常范围。腹部 B 型超声、心电图、X 线胸部检查也在正常范围内。口服海洋鱼皮胶原肽过程中均未见过敏及不良反应。

 

       3　讨论

 

       胶原是生物大分子物质，胶原及其不同水解产物的功能特性早已被研究，胶原、明胶和水解胶原蛋白的护肤作用也有报道。本文旨在研究相对分子质量＜ 1 000 的海洋鱼皮胶原肽对皮肤的改善作用。研究发现，受试者食用海洋鱼皮胶原肽后，皮肤水份显著增加，并且受试者黄褐斑的颜色明显降低，黄褐斑的面积也明显缩小；而空白对照组均无明显变化。试验过程中，海洋鱼皮胶原肽的给予途径是口服，而不是外部涂抹，可以认为海洋鱼皮胶原肽进入人体后通过内在机制发挥对皮肤的作用。

 

       海洋鱼皮胶原肽增加皮肤水份，与Koyama等报道的胶原肽增加角质层的吸水性结果一致。小分子胶原肽易于吸收，服用 1 ～ 2 h 后血液中的浓度很快达到高峰，并能检测到食源性胶原肽成分。小分子的胶原肽随血液循环到达皮肤真皮层，供成纤维细胞利用，合成胶原纤维。而服用胶原肽又能够增加纤维细胞密度，胶原纤维直径增大、密度增加，有利于维持皮肤真皮层正常的结构和功能。胶原肽中含有大量的亲水基团（-COOH、-NH2、-OH 等）。随着真皮层结构的改善，部分亲水基团转移到角质层，增加了角质层的吸水能力。

 

       Koyama等报道摄入胶原肽10 g /d，连续60 d，受试者皮肤水份获明显改善；本研究中受试者口服海洋鱼皮胶原肽 2.7 g /d，持续 30 d，皮肤水份即获得明显改善。海洋鱼皮胶原肽服用量小、时间短，而效果明显，这也间接表明了小分子的海洋鱼皮胶原肽更易被机体吸收和利用。

 

       皮肤色素或黄褐斑与酪氨酸酶有密切关系。在酪氨酸酶的作用下，酪氨酸转化为黑色素，从而加重皮肤色斑的形成。口服海洋鱼皮胶原肽，由于胶原肽分子量小，易吸收，可随血液循环快速进入到皮肤真皮层，胶原肽中大量的酪氨酸残基，可以与酪氨酸酶的中心基团结合，从而抑制了酪氨酸酶的活性，减少了酪氨酸的转化和黑色素形成，从而有助于减少面部黄褐斑的面积和颜色。文献报道，抑制酪氨酸酶的活性最强的片段主要集中在相对分子质量＜1 000的胶原肽。这与本研究使用相对分子质量＜1 000的海洋鱼皮胶原肽具有明显祛除黄褐效果，是基本一致的。

 

       胶原肽对皮肤的保护与其抗氧化作用密切相关。皮肤干燥、出现色斑均为皮肤老化的表现，自由基损伤是导致这些变化的重要因素。由于紫外线、压力、代谢废物等因素的影响，体内自由基增多，导致皮肤中的胶原纤维老化、断裂，皮肤松弛、粗糙、干燥，出现皱纹，色素增多。裴新荣等 [3] 报道，海洋鱼皮胶原肽能够增强超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等抗氧化酶的活性，降低脂质过氧化产物丙二醛的水平。因此，海洋胶原肽还能够清除自由基，减轻对成纤维细胞和胶原蛋白的损害，避免皮肤胶原的过度交联，起到保护皮肤的作用。

 

       研究结果显示，海洋胶原肽能够明显改善身体疲劳、烦燥、失眠等不适现象。Olson 等也将口服胶原肽用于改善慢性纤维肌痛患者的症状（包括睡眠欠佳、烦燥、健忘、腰膝酸软、疲劳感等）。虽然胶原肽改善不适症状的机制还不完全清楚，但Jacobsen等研究指出，纤维肌痛患者睡眠质量低与血清中Ⅲ型前胶原氨基肽浓度低有一定关系。另外，胶原肽参与胶原蛋白的合成，而胶原蛋白分布在全身的多个组织器官，尤其在一些组织器官的基底膜中作为细胞间质的成分存在，有助于改善细胞的生存环境，提高细胞的活力和功能，从而使组织器官的功能恢复和改善。这可能是胶原肽能够改善不适症状的根本原因。