3 试剂
3.1 组合试剂盒
1号瓶:内含β-果糖苷酶(fructosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠;
2号瓶:内含 0.2mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH=7.6) 200mL,其中含 4 -氨基安替比
林0. 00154mol/L;
3号瓶:内含 0.022mol/L苯酚溶液200mL;
4号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)800U(活力单位)、过氧化物酶(辣根,
peroxidase)2000U(活力单位)。
1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。
3.2 酶试剂溶液
3.2.1 将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解,使其体积为66mL,轻轻摇动(勿剧烈摇动),使
酶完全溶解。此溶液即为β-果糖苷酶试剂,其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol/L,
pH=4.6。在4 ℃左右保存,有效期一个月。
3.2.2 将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。
3.2.3 将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中,轻轻摇动(勿剧烈摇动),使酶完全溶解,
即为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存,有效期一个月。
3.3 0.085mol/L亚铁氰化钾溶液
称取3.7g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6?3H2O,GB1273,分析纯],溶于100mL 重蒸馏水中,
摇匀。
3.4 0.25mol/L硫酸锌溶液
称取7.7g硫酸锌(ZnSO4?7H2O,GB666,分析纯),溶于100mL重蒸馏水中,摇匀。
3.5 0.1mol/L氢氧化钠溶液
称取0.4g氢氧化钠(GB629,分析纯),溶于100mL重蒸馏水中,摇匀。
3.6 蔗糖标准溶液
称取经100±2℃烘烤2h的蔗糖(HG3-1001,分析纯)0.4000g,溶于重蒸馏水中,定容
至100mL, 摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00 -->V100,即为400μg/mL蔗糖标准
溶液。
4 仪器和设备
实验室常规仪器及下列各项:
4.1 研钵或粉碎机。
4.2 分析筛。
4.3 组织捣碎机。
4.4 恒温水浴锅。
4.5 可见光分光光度计。
4.6 微量移液管:1.00mL,精度0.01mL。
5 试样的制备
5.1 固体样品
粉末状样品: 取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内。
颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g,用粉碎机粉碎,或用研钵研细,通过100
目分析筛, 置于密闭的玻璃容器内。
新鲜水果、蔬菜等固体样品:取有代表性的可食部分至少200g,用组织捣碎机捣碎,
置于密闭的玻璃容器内。
5.2 糊状样品
取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内。
5.3 固液体样品
取有代表性的样品至少200g,用组织捣碎机捣碎,置于密闭的玻璃容器内。
5.4 液体样品
取有代表性的样品至少200g,充分混匀,置于密闭的玻璃容器内。
6 试液的制备
6.1 不含蛋白质的试样
用100mL烧杯称取试样(5.1~5.4) 0.5~10g(精确至0.0001g),加少量重蒸馏水,转移
到250mL容量瓶中,用重蒸馏水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初的滤液30mL,
即为试液。
试液中蔗糖含量大于2000μg/mL时,应适当增加定容体积。
6.2 含蛋白质的试样
用100mL烧杯称取试样(5.1~5.4) 0.5~10g(精确至0.0001g),加少量重蒸馏水,转移
到250mL容量瓶中,加入0.085mol/L 亚铁氰化钾溶液(3.3)5mL、0.25mol/L 硫酸锌溶液
(3.4)5mL和0.1mol/L氢氧化钠溶液(3.5)10mL,使蛋白质沉淀。用重蒸馏水定容至刻度,
摇匀后用快速滤纸过滤。 弃去最初滤液30mL,即为试液。
试液中蔗糖含量大于2000μg/mL时,应适当增加定容体积。