7.2 沉淀蛋白质
在水浴上使提取液浓缩至10mL以下,依次加入1:10硫酸溶液1.0mL和10%钨酸钠溶液
1mL混匀,继续加热5min,沉淀蛋白质。取下,彻底冷却至室温,过滤,用少量水洗涤滤
纸,滤液准确稀释至50mL或100mL,备用。
7.3 纯化
吸取滤液25.0mL于100mL锥形瓶中,在水浴上加热到70℃,加入聚酰胺粉0.5～1g,充
分搅拌,使胭脂红完全被吸附。将聚酰胺粉全部转入G3砂芯漏斗,缓慢地抽滤。用20%柠
檬酸酸化至pH4的70℃水分三次洗涤,每次20mL,再用70℃水多次洗涤至滤液为中性。以
上洗涤过程要搅拌。用1 : 99氨溶液分次解吸全部胭脂红色素,收集全部解吸液,于水浴
上驱氨,准确稀释至25mL或50mL,备用。
同一试样进行两次测定,并做空白试验。
7.4 测定
分别吸取胭脂红标准使用液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL置50mL容量瓶中,稀
释至刻度,此时瓶中胭脂红浓度分别为0、4、8、12、16、20μg/mL,上述标准溶液用1cm
比色杯,以标准系列空白调节零点,在510nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线。试液用1cm
比色杯,以试剂空白调节零点,与标准同样条件测定。根据试液的吸光度从标准曲线上查
得相应的胭脂红浓度。
8 分析结果的计算
c×10**-6
X (g/kg) = ━━━━━━━━━━━━
25 1
m×━━×━━×10**-3
V1 V2
式中: X??试样中胭脂红含量,g/kg;
c??试液中胭脂红浓度,μg/mL;
m??试样质量,g;
V1??试样沉淀蛋白质后总体积,mL;
V2??试样胭脂红解吸后总体积,mL。
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