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全氮和粗蛋白测定法

Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87
crude protein
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本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。
1 仪器
a. 分析天平:感量0.1mg;
b. 凯氏烧瓶;
c. 铁架、铁圈、石棉网;
d. 煤气灯(或电炉);
e. 干燥管、抽气管、橡皮管;
f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶;
g. 粉碎机等。
2 试剂与溶液
2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。
2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂
硫酸铜 : 硫酸钾 = 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。
2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。
2.4 4%硼酸溶液
称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。
2.5 浓硫酸 (分析纯)
2.6 40%氢氧化钠溶液
称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。
2.7 0.1N盐酸标准溶液
量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。
2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份,
每份重约0.17g,称准至0.0002g。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL,
温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 2 滴,然后用待标定的盐酸
溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。
计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算
G
N = ━━━━━━ …………………………………… (3)
V ×0.05299
式中:N??盐酸标准溶液的当量浓度;
G??无水碳酸钠之重量,g;
V??盐酸溶液之用量,mL;
0.05299??每毫克当量Na2CO3之重量,g。
2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥
形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。
记下耗用mL数。
计算:
N NaOH×V NaOH
盐酸当量 = ━━━━━━━━ …………………………………(2)
25
式中:N NaOH??已知浓度的氢氧化钠溶液的当量浓度;
V NaOH??氢氧化钠溶液的滴定量,mL;
25??待标定盐酸吸取量,mL。
2.7.3 标定程序:若要使盐酸标准溶液的当量浓度尽可能接近0.1000N,可根据初标定浓
度加水或盐酸,多次标定后最终达到。为操作简便,可使用2.7.2法,最后用2.7.1法标定。

3 操作方法
3.1 消化
准确吸取原样 2mL(或称取固体样品0.5g,称准至0.0002g)。置于干燥的500mL凯氏
烧瓶中,加入硫酸铜?硫酸钾混合试剂 5g,浓硫酸 8mL,然后放入通风橱内 (烧瓶口上放
置小漏斗),加热消化至烧瓶内碳化颗粒完全消失,消化液呈浅绿色后,再继续加热10min
左右,一般消化时间不超过30min。也可于瓶颈口上插一支干燥管用橡皮管连接玻璃水泵,
借以将腐蚀性气体抽去。
3.2 蒸馏
冷却后,缓慢加入蒸馏水120mL,使其全部溶解,冷凝管下端的导管插入盛有4%硼酸溶
液35mL及混合指示剂 2滴的250mL锥形瓶中的液面下,然后,沿凯氏烧瓶瓶壁加入40%氢氧
化钠溶液40mL,玻璃珠 4～5粒或锌粒 1～2粒,迅速连接蒸馏装置,以防氨气逸出。连接
好后,检查是否漏气,缓缓摇匀,接通冷却水,加热、蒸馏,使瓶内液体蒸去三分之二停止
蒸馏。
3.3 滴定
将锥形瓶内接收液用0.1N盐酸标准溶液滴定至暗红色为终点。记下耗用mL数。平行
试验允许误差为0.2mL。
同时做试剂空白试验。
4 计算
4.1 全氮TN含量计算如下:
(V -Vo)×N×0.014
TN = ━━━━━━━━━━×100……………………… (3)
W
式中:V??样品滴定时耗用盐酸标准溶液数,mL;
Vo??试剂空白滴定耗用盐酸标准溶液数,mL;
N??盐酸标准溶液当量浓度;
0.014??氮的毫克当量;
W??样品mL数或g数;
TN??样品全氮含量,g/100mL或g。
4.2 原料粗蛋白P计算如下:
P =6.25TN ………………………………………………(4)
式中:P??原料粗蛋白含量,g/100mL或g;
6.25??蛋白质中含氮系数;
TN??全氮含量,g/100mL或g。

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附加说明:
本标准由商业部副食品局提出。
本标准由上海市酿造科学研究所起草。
本标准主要起草人须凤高。
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中华人民共和国商业部1987-11-20批准 1988-07-01实施?