中华人民共和国国家标准 水果、蔬菜及制品 苯甲酸含量的测定 GB 12289-90
Fruits,vegetables and derived products?
Determination of benzoic acid content
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本标准参照采用国际标准ISO 5518-1978《水果、蔬菜及其制品苯甲酸含量的测定
?分光光度法》和ISO 6560-1983《水果、蔬菜及制品苯甲酸含量的测定(含量超过200mg
/L或kg)?─分子吸收分光光度法》。

1 主题内容及适用范围
本标准规定了水果、蔬菜及制品中苯甲酸含量的测定方法。分光光度法适用于苯甲酸
含量低于200mg/L或kg产品的测定。分子吸收分光光度法适用于测定苯甲酸含量超过200
mg/L或kg的产品,重点包括水果汁、蕃茄酱制品,以及用醋或乳酸保存的产品。
分光光度法不适用于有对氯苯甲酸及有大量肉桂酸存在的产品。

第 一 篇
分光光度法

2 原理
试样混匀后,稀释、酸化、用乙醚提取苯甲酸,在碱性条件下重提,通过铬酸氧化
提纯,最后用分光光度计测定溶解在乙醚中的苯甲酸。

3 试剂和溶液
本标准所用试剂均为分析纯。使用蒸馏水或相应纯度的水。
3.1 酒石酸(Q/HG 10--2187),结晶状；
3.2 氢氧化钠(GB 1266)溶液,1mol/L；
3.3 重铬酸钾(GB 642)溶液,33～34g/L(w/v)；
3.4 硫酸溶液,2＋1,用2体积的浓硫酸(GB 625)ρ201.84g/mL,加到1体积的水中；
3.5 乙醚(HG 3--1002),重新蒸馏；
3.6 苯甲酸标准溶液：0.100g/L乙醚溶液；
3.7 碳酸氢钠(GB 640)。

4 仪器、设备
常用实验室仪器、设备、包括：
4.1 容量瓶,50mL；
4.2 烧杯,50、100mL；
4.3 移液管,20mL；
4.4 刻度吸管；
4.5 锥形瓶,250mL具有磨口玻璃塞；
4.6 分液漏斗,500mL；
4.7 恒温水浴,温度能控制在70～80℃；
4.8 捣碎机；
4.9 紫外分光光度计：具光径长10mm的石英比色杯；
4.10 分析天平。

5 分析步骤
5.1 试样的制备
5.1.1 液体样品(汁液),可流动浆液(糖浆)和粘稠的样品(果酱)。将样品混合均匀。
5.1.2 固体样品(水果、蔬菜),将样品切成小块,检出种子和果壳,混匀,取约40g放
入捣碎机中捣碎。冷冻样品首先在密闭的容器内融化,将融化液与样品合并后捣碎。
5.2 试样的分取
5.2.1 液体样品
用移液管(4.3)吸取20mL无悬浮物的试样(5.1)用约50mL水稀释并转移至500mL的分
液漏斗(4.6)(分液漏斗A)中。或用感量为0.01g的天平称取试样20.00g。
5.2.2 流动的浆液
取20mL试样(5.1)放在研钵里用20mL水稀释,倾倒过滤。然后连续两次用20mL水溶解
残渣,倾倒过滤,收集滤液于500mL分液漏斗(4.6)(A)中。也可用百分之一天平称取20.00g
试样。
5.2.3 粘稠或固体样品
用百分之一天平称取10.00g样品(5.1),放入250mL锥形瓶(4.5)中,加30～40mL的水。
加入约50mg碳酸氢钠(3.7),然后放在水浴(4.7)上,温度控制在70～80℃,放置15～30min
后,过滤瓶中的内容物,并用15～20mL水冲洗两次,全部滤液并入500mL分液漏斗(4.6)(A)
中,使之冷却。
5.3 苯甲酸的提取
5.3.1 取1g酒石酸(3.1)放入装有稀释试样(5.2)的分液漏斗(A)中,加入60mL的乙醚(3.5)
并小心摇动。静置使之分层。保留醚层,将水层转入第二个500mL分液漏斗(4.6)(B)中,用60
mL乙醚萃取水相,合并乙醚相于分液漏斗(A)中。
6.3.2 从乙醚相提取苯甲酸,连续加入氢氧化钠溶液(3.2)10mL、5mL,水10mL两次,每加
一次及时摇动,使之分层,收集水相于蒸发皿中,将皿放在水浴(4.7)上,温度控制在70～
80℃,浓缩碱溶液体积至一半为止。
5.4 苯甲酸的提纯
冷却后,将蒸发皿的内容物放入盛有20mL硫酸溶液(3.4)和20mL重铬酸钾溶液(3.3)的
250mL锥形瓶(4.5)中。盖塞,摇匀,放置1h以上。
5.5 苯甲酸的萃取
用20～25mL的乙醚萃取上述(5.4)提纯的苯甲酸两次,收集乙醚液,用5mL的水洗乙醚
溶液两次,然后小心的倾出乙醚并通过干滤纸过滤至50mL的容量瓶(4.1)中,用乙醚冲洗滤
纸并定容至刻度。
5.6 测定
用分光光度计(4.9)在267.5,272和276.5nm波长处以纯乙醚为对照,测量乙醚层(5.5)
的吸光度。
苯甲酸的吸光度A按式(1)计算：
A1＋A3
A＝A2－────………………………………………… (1) 

2
式中：A1??在267.5nm的吸光度；
A2??在272nm的吸光度；
A3??在276.5nm的吸光度。
同一试样(5.1)需进行两次测定。
5.7 标准曲线的绘制
向6个50mL容量瓶(4.1)中分别加入苯甲酸标准溶液(3.6),各5.0、7.5、10.0、12.5、
15.0、20.0mL,用乙醚(3.5)稀释至刻度。该标准系列溶液的浓度为10、15、20、25、30、
40mg/L。
按照5.6进行测定。
以苯甲酸含量mg/L为横坐标,吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。

6 分析结果表示
6.1 计算方法和公式
6.1.1 液体样品
苯甲酸的含量以mg/L表示,按式(2)计算：
50
苯甲酸(mg/L)＝m2×─-＝2.5m2 ……………………………… (2)
20
式中：m2??由标准曲线(5.7)上查得苯甲酸的含量,mg/L。
6.1.2 粘稠或固体样品
苯甲酸的含量以mg/kg表示,按式(3)计算：
50
苯甲酸(mg/kg)＝m2×─- …………………………………… (3)
m1
式中：m1??称取试样的重量(5.2),g；
m2??标准曲线(5.7)上查得苯甲酸含量,mg。
6.2 允许差
同一分析人员对同一试样两个平行测定值之差不得超过10mg/L或10mg/kg。

第 二 章
分子吸收分光光度法

7 原理
用乙醚从酸化的试样中提取苯甲酸,随后消化、还原,与盐酸羟胺进行莫尔氏反应。于
分光光度计上测定已得到的红色化合物吸光度。

8 试剂和溶液
所有试剂应是分析纯,水用蒸馏水或相当纯度的水。
8.1 苯甲酸标准溶液：浓度为1g/L。
称取100mg苯甲酸精确至0.0001g,溶解于25mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液中并用水稀释
至100mL。此标准溶液含苯甲酸1mg/mL。
8.2 硝化液
23g硝酸钾(GB 647)溶解于250mL浓硫酸(ρ20＝1.84g/mL)中。
8.3 盐酸羟胺(HG3--997)溶液,20g/L。
8.4 浓氨溶液(GB 631)(ρ20＝0.910g/mL)。
8.5 酚酞溶液
1g酚酞(HGB 3039)溶解于100mL60％,乙醇(v/v)中。
8.6 氢氧化钠(GB 1266--77)溶液,1mol/L。
8.7 氢氧化钠溶液,0.1mol/L。
8.8 硫酸溶液,25％(m/m)。
8.9 卡瑞(Carrez)Ⅰ溶液：
150g三合水亚铁氰化钾(GB 1273)〔K4Fe(CN)?3H2O〕溶解于水中并稀释至1 000mL。
8.10 卡瑞(Carrez)Ⅱ溶液：
300g七合水硫酸锌(GB 666)(ZnSO4?7H2O)溶解于水中并稀释至1 000mL。
8.11 乙醚(HG 3--1002),近期重蒸馏。

9 仪器、设备
常用实验室仪器、设备,包括：
9.1 分液漏斗,200mL,装有磨口塞。
9.2 移液管,1、2、5、10、25和50mL。
9.3 移液管,2mL、分刻度至0.1mL。
9.4 容量瓶,10和100mL备有磨口玻璃塞。
9.5 沸水浴。
9.6 试管,直径1.5或2.0cm。
9.7 烘箱,能控温在103±2℃。
9.8 恒温水浴,控温在20±2℃和60±2℃。
9.9 分光光度计,适合于533nm波长处进行测量,备光径长10mm的比色杯。

10 分析步骤
10.1 试样的制备
10.1.1 液体样品
试样充分混匀。
10.1.2 半粘稠样品
将试样混合完全。取部分试样通过四层纱布压汁,弃去初始几滴滤液,收集剩余的部
分进行测定。
10.1.3 粘稠样品
试样充分混匀。
10.2 试样的分取
10.2.1 液体样品
用移液管(9.2),取10mL试样移至200mL分液漏斗(9.1)中。
10.2.2 粘稠样品
称取试样10g,准确至0.01g,加少量水,加2滴酚酞溶液(8.5),再加氢氧化钠溶液(8.6)
使之呈碱性。放在沸水浴(9.5)上加热30min。冷却后,移至100mL容量瓶中,加入2mL卡
瑞(Carrez)Ⅰ溶液(8.9)和2mL卡瑞(Carrez)Ⅱ溶液(8.10),用水稀释至刻度。放置30min,
然后离心或过滤。该澄清的溶液用于提取(10.3)。
10.3 苯甲酸的提取和纯化
10.3.1 液体样品
加2mL硫酸溶液(8.8)至盛有试样的分液漏斗中。加25mL乙醚(8.11),振荡分出醚层,
用25mL乙醚再重复振荡提取一次,合并乙醚相。
加1滴酚酞溶液(8.5)加2mL氢氧化钠溶液(8.6)并振荡5min。分离碱相。然后用2mL
氢氧化钠溶液(8.7)振荡提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶(9.4)中并用水稀释至
刻度。
10.3.2 粘稠样品
50mL澄清后的溶液(10.2.2)于200mL分液漏斗中,加50mL硫酸溶液(8.8),加50mL乙醚,
振荡,分出醚层。用50mL乙醚重复提取两次以上。合并乙醚相于分液漏斗中。加5mL水,
振荡,并弃去水相。
加2mL氢氧化钠溶液(8.6)于醚层,振荡(形成苯甲酸钠)分出碱相,然后用2mL氢氧化
钠溶液(8.7)再振摇提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶(9.4)中,并用水稀释至刻度。
10.4 测定
10.4.1 显色
根据苯甲酸含量,取0.5～1.0mL碱提取液移入试管(9.6)中,在沸水浴(9.5)上蒸发至
干。移至烘箱(9.7)中,在103±2℃下干燥15min。
随后冷却,加1mL硝化液(8.2)放在沸水浴上加热20min(开始时振摇试管几分钟)。
移入水浴(9.8),保持在20±2℃下,放置15min。小心的加2mL水,再放置15min。加10
mL氨溶液(8.4),分次加,最初的5mL,每次加0.5mL,剩余的每次加1mL。放在水浴上15min。
注意水浴的温度控制在20±2℃。加2mL盐酸羟胺溶液(8.3)并放在60±2℃水浴(9.8)上保
持5min。
10.4.2 分光光度计测量
冷却试管,移入比色杯。在30min之内用分光光度计,在533nm波长处,以试剂空白为
对照,测量溶液的吸光度。
同一试样作平行测定。
10.5 标准曲线的绘制。
10.5.1 标准系列溶液的制备
用移液管(9.3)连续向5支试管中转移苯甲酸标准溶液(8.1)0.6、0.8、1.0、1.2、
1.4mL,相对应的苯甲酸量为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mg。
向另1支试管中移入氢氧化钠溶液(8.7)0.5mL作试剂空白。
10.5.2 显色
将试管移入沸水浴中蒸发至干。然后将试管移入烘箱中,并在103±2℃下干燥15min。
以下步骤按10.4.1第二段起所描述的进行。
10.5.3 分光光度测量
按10.4.2规定的操作进行。
10.5.4 标准曲线的绘制
以苯甲酸标准溶液的毫克数为横坐标,以所对应的吸光度为纵坐标,绘制曲线。

11 分析结果表示
11.1 计算方法和公式
11.1.1 液体样品
苯甲酸的含量以mg/L表示,按式(4)计算：
m×V2
苯甲酸(mg/L)＝───×1000 …………………………………… (4)
V1×V3
式中：m??从标准曲线查得苯甲酸的量,mg；
V1??试样分取的体积,mL；
V2??碱提取液的体积,mL；
V3??进行显色时碱提取液的体积,mL。

11.1.2 粘稠样品
苯甲酸的含量以mg/kg表示,按式(5)计算：
m2×V1×V3
苯甲酸(mg/kg)＝─────-×1000…………………………… (5)
M1×V2×V4
式中：m1??试样分取的量,g；
m2??从标准曲线查得苯甲酸的量,mg；
V1??制备的澄清液的体积,mL；
V2??用于提取的澄清液的体积,mL；
V3??碱提取液的体积,mL；
V4??进行显色的碱溶液体积,mL。
11.2 允许差
同一分析人员对同一试样两个平行测定值之差不应超过10mg/L或10mg/kg。

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附加说明：
本标准由中华人民共和国农业部提出；全国农业分析标准化技术委员会归口。
本标准由中国农业科学院分析测试中心负责起草。
本标准主要起草人李伟格、陈必芳、李兰。
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国家技术监督局1990-03-29批准 1990-12-01实施