中华人民共和国国家标准 UDC 634 中华人民共和国国家标准 UDC 
634.1/.8
:635.1/.8
水果、蔬菜维生素C含量测定法 :543
(2,6－二氯靛酚滴定法) GB 6195?86

Determination of vitamin C in vegetables and fruits
(2,6-dichloro-indophenol titration method)
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1 适用范围

本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定(不含二价铁、二价
锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品。

2 测定原理

染料2,6－二氯靛酚的颜色反应表现两种特性,一是取决于其氧化还原状态,氧化态
为深蓝色,还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响,在碱性溶液中呈深蓝色,在酸性介
质中呈浅红色。
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素 C的酸性浸出液进行氧化还原滴定,染料被
还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,由染料用量
计算样品中还原型抗坏血酸的含量。

3 仪器设备

a. 高速组织捣碎机:8000～12000r/min。
b. 分析天平。
c. 滴定管:25ml、10ml。
d. 容量瓶:100ml。
e. 锥形瓶:100ml、50ml。
f. 吸管:10ml、5ml、2ml、1ml。
g. 烧杯:250ml、50ml。
h. 漏斗。

4 试剂(凡未加说明者均为分析纯)

4.1 浸提剂
4.1.1 偏磷酸:2%溶液(W/V)* ,
4.1.2 草酸:2%溶液(W/V)。
4.2 抗坏血酸标准溶液(1mg/ml):称取 100mg(准确至 0.1mg)抗坏血酸**,溶于浸提剂
中并稀至100ml。现配现用。
──────────
* 偏磷酸不稳定,切勿加热。
** 一般抗坏血酸纯度为99.5%以上,可不标定。如试剂发黄,则弃去不用。若要检查其
纯度,可按附录B方法标定。
4.3 2,6－二氯靛酚(2,6－二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠 52mg溶解在200ml
热蒸馏水中,然后称取 2,6－二氯靛酚 50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至
250ml,过滤至棕色瓶内,保存在冰箱中。每次使用前,用标准抗坏血酸标定其滴定度。即
吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中,加入10ml浸提剂,摇匀,用2 ,6－二氯靛酚溶
液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取 10ml浸提剂做空白试验。
滴定度按式(1)计算:
C?V
滴定度 T(mg/ml)＝─────………………………… (1)
V1－V2
式中: T?─每毫升2,6－二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数; 
C?─抗坏血酸的浓度,mg/ml;
V?─吸取抗坏血酸的体积, ml;
V1?─滴定抗坏血酸溶液所用 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;
V2?─滴定空白所用2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml。
4.4 白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。

5 测定步骤

5.1 样液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入组织捣碎机中,加 100ml浸
提剂,迅速捣成匀浆。称 10～40g浆状样品,用浸提剂将样品移入 100ml容量瓶,并稀释
至刻度,摇匀过滤。若滤液有色,可按每克样品加 0.4g白陶土脱色后再过滤。
5.2 滴定:吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中,用已标定过的 2,6－二氯靛酚溶液滴定,
直至溶液呈粉红色 15s不褪色为止。同时做空白试验。

6 结果计算

6.1 计算公式:
维生素 C按式(2)计算:
(V－V0)?T?A
维生素C(mg/100g)＝────────-×100 …………………(2)
W
式中: V??滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;
V0??滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;
T??2,6－二氯靛酚染料滴定度,mg/ml;
A??稀释倍数;
W??样品重量,g。
6.2 平行测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字,含量低的保留小数点后两
位数字。
6.3 平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于 20mg/100g时,不得超过 2%,小于
20mg/100g时,不得超过 5%。

附 录 A
二甲苯－二氯靛酚比色法
(补充法)

A.1 适用范围
测定深色样品中还原型抗坏血酸。
A.2 测定原理
用定量的 2,6－二氯靛酚染料与试样中的维生素 C进行氧化还原反应,多余的染料
在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相
关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素 C含量。
A.3 仪器设备
A.3.1 分光光度计或比色计。
A.3.2 具塞试管:50ml。
A.4 试剂(皆为分析纯)
A.4.1 偏磷酸:2%溶液(W/V)。
A.4.2 乙酸钠缓冲溶液(pH4.0):500ml50%(W/V)的乙酸钠溶液与 500ml冰乙酸混合。
A.4.3 2,6－二氯靛酚溶液:参照 4.3条。
A.4.4 二甲苯。
A.5 测定步骤
A.5.1 标准曲线的绘制:用6只50ml具塞试管加入5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓
冲液,然后依次加入0.0 ,0.1,0.3,0.6,0.9,1.2及 1.5ml 2,6－二氯靛酚溶液,用
力摇动5s,再向各试管中加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,静置分层后与试样管同时比色
(无染料的试液作空白),以吸光度为纵坐标,2,6－二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标
准曲线。
A.5.2 吸取5ml2%偏磷酸样品浸出液(参照5.1条)于50ml具塞试管中,加5mlpH4.0的
乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液,激烈摇动5s,立即加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,待静
置分层后,从二甲苯层中小心吸取一份,放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记
录吸光度A,在标准曲线上查出二甲苯层中 2,6－二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30
min内完成。
A.6 计算公式
(2－V)?T?A
维生素 C(mg/100g)＝──────×100
W
式中: 2?─所用 2,6－二氯靛酚染料的体积,ml ;
V?─查得 2,6－二氯靛酚溶液的体积,ml;
A?─稀释倍数;
T?─染料滴定度,mg/ml;
W?─样品重量,g。

附 录 B
抗坏血酸纯度检验法 
(补充件)

B.1 称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸待测样品,用 2%偏磷酸或 2%草酸溶液溶解稀
释至 100ml。
B.2 吸取抗坏血酸溶液1ml于盛 10ml 2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中,加入6%碘
化钾溶液 0.5ml和1%淀粉溶液五滴,摇匀。用 1.67×10**－4M碘酸钾标准溶液滴定,
终点为极淡蓝色。
B.3 计算公式
B.3.1 抗坏血酸浓度按式(B1)计算:
V1×0.088
抗坏血酸浓度＝────── ……………………………… (B1)
V2
式中: V1?─滴定时消耗1.67×10**－4 M碘酸钾标准溶液的体积,ml;
V2?─所取抗坏血酸溶液的体积,ml;
0.088?─1 ml 1.67×10**－4 M碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量,mg;
B.3.2 抗坏血酸纯度(%)按式(B2)计算:
C?V
抗坏血酸纯度(%)＝───×100 ……………………………(B2)
W
式中: C?─所标定抗坏血酸的浓度,mg/ml;
V?─抗坏血酸溶液总体积,ml;
W?─抗坏血酸重量,mg。

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附加说明:
本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。
本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。
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国家标准局 1986-01-18发布 1986-08-01实施