前　　　言 　　　　　　　前　　　言

食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他
糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶-比色法是在检索了近20年148
篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(β-果
糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。
蔗糖酶解后的产物-葡萄糖的测定方法，与 GB／T 16285－96保持一致。
本标准的附录 A是标准的附录。
本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。
本标准起草单位：中国农垦北方食品监测中心。
本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。
本标准主要起草人：张宗城，刘宁，郝煜。

目　　　次
前言
1 范围 ………………………………………………………………………………………… X
2 原理 ………………………………………………………………………………………… X
3 试剂 ………………………………………………………………………………………… X
4 仪器和设备 ………………………………………………………………………………… X
5 试样的制备 ………………………………………………………………………………… X
6 试液的制备 ………………………………………………………………………………… X
7 分析步骤 …………………………………………………………………………………… X
8 分析结果的表述 …………………………………………………………………………… X
9 允许差 ……………………………………………………………………………………… X
附录A (标准的附录) ………………………………………………………………………… X

中华人民共和国国家标准

食品中蔗糖的测定方法 GB／T 16286-96
酶－比色法

Method for Determination of sucrose in food
Enzyme-Colorimetric method
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1 范围
本标准规定了用酶－比色法测定食品中蔗糖的方法，适用于各类食品中蔗糖的测定。
本标准最低检出限量为0.04μg(蔗糖)／mL(试液)。
2 原理
在β－果糖苷酶(β－FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD) 
在有氧条件下，催化 β－D－葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D －葡萄糖酸－δ－
内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4 －氨基安替比林和苯酚生成红
色醌亚胺。 在波长505nm处测定醌亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。

β－FS
C12H22O11 ＋ H2O ────> C6H12O6(G) ＋ C6H12O6(F)
GOD
C6H12O6(G) ＋ O2 ────> C6H10O6 ＋ H2O2
POD
H2O2 ＋ C6H5OH ＋ C11H13N3O ────> C6H5NO ＋ H2O
3 试剂
3.1 组合试剂盒
1号瓶：内含β－果糖苷酶(fructosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠；
2号瓶：内含 0.2mol／L 磷酸盐缓冲液 (pH＝7.6) 200mL，其中含 4 －氨基安替比
林0. 00154mol／L；
3号瓶：内含 0.022mol／L苯酚溶液200mL；
4号瓶：内含葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)800U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，
peroxidase)2000U(活力单位)。
1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。
3.2 酶试剂溶液
3.2.1 将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使
酶完全溶解。此溶液即为β－果糖苷酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol／L，
pH＝4.6。在4 ℃左右保存，有效期一个月。
3.2.2 将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。
3.2.3 将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，
即为葡萄糖氧化酶－过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存，有效期一个月。
3.3 0.085mol／L亚铁氰化钾溶液
称取3.7g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6?3H2O，GB1273，分析纯]，溶于100mL 重蒸馏水中，
摇匀。
3.4 0.25mol／L硫酸锌溶液
称取7.7g硫酸锌(ZnSO4?7H2O，GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。
3.5 0.1mol／L氢氧化钠溶液
称取0.4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。
3.6 蔗糖标准溶液
称取经100±2℃烘烤2h的蔗糖(HG3－1001，分析纯)0.4000g，溶于重蒸馏水中，定容
至100mL， 摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00 －－>V100，即为400μg／mL蔗糖标准
溶液。
4 仪器和设备
实验室常规仪器及下列各项：
4.1 研钵或粉碎机。
4.2 分析筛。
4.3 组织捣碎机。
4.4 恒温水浴锅。
4.5 可见光分光光度计。
4.6 微量移液管:1.00mL，精度0.01mL。
5 试样的制备
5.1 固体样品
粉末状样品: 取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。
颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100
目分析筛， 置于密闭的玻璃容器内。
新鲜水果、蔬菜等固体样品：取有代表性的可食部分至少200g，用组织捣碎机捣碎，
置于密闭的玻璃容器内。
5.2 糊状样品
取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。
5.3 固液体样品 
取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。
5.4 液体样品
取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。
6 试液的制备
6.1 不含蛋白质的试样
用100mL烧杯称取试样(5.1～5.4) 0.5～10g(精确至0.0001g)，加少量重蒸馏水，转移
到250mL容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初的滤液30mL，
即为试液。
试液中蔗糖含量大于2000μg／mL时，应适当增加定容体积。
6.2 含蛋白质的试样
用100mL烧杯称取试样(5.1～5.4) 0.5～10g(精确至0.0001g)，加少量重蒸馏水，转移
到250mL容量瓶中，加入0.085mol／L 亚铁氰化钾溶液(3.3)5mL、0.25mol／L 硫酸锌溶液
(3.4)5mL和0.1mol／L氢氧化钠溶液(3.5)10mL，使蛋白质沉淀。用重蒸馏水定容至刻度，
摇匀后用快速滤纸过滤。 弃去最初滤液30mL，即为试液。
试液中蔗糖含量大于2000μg／mL时，应适当增加定容体积。
7 分析步骤
7.1 标准曲线的绘制
用微量移液管取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL蔗糖标准溶液(3.6)，分别置
于10mL 比色管中，各加入1.0mL β－果糖苷酶试剂溶液(3.2.1)，摇匀，在36±1℃水浴锅
中恒温20min。 取出后加入3mL葡萄糖氧化酶 －过氧化物酶试剂溶液(3.2.3)，在36±1℃
水浴锅中恒温40min。 冷却至室温，用重蒸馏水定容至10mL。用1cm比色皿，以蔗糖标准溶
液含量为0.00 的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处测定各比色管内溶液的
吸光度。
以蔗糖含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。
7.2 试液吸光度的测定
用微量移液管取0.20～5.00mL (依试液中蔗糖的含量而定) 试液(6.1～6.2)，置于10mL
比色管中。以下按7.1步骤操作；但须用等量试液(6.1～6.2)调整分光光度计零点。
测出试液吸光度后，在标准曲线上查出对应的蔗糖含量。
8 分析结果的表述
食品中蔗糖的含量以质量百分率表示，按下式计算：
C 1 C
x ＝ ━━━━━━ × ━━━━━━━ ×100 ＝ ━━━━━━━━━━━
V 2 1000×1000 V 2
m × ━━━ m ×━━━× 10000
V 1 V 1
式中：x ── 样品中蔗糖的含量，质量百分率，％；
C ── 标准曲线上查出的试液中蔗糖含量，μg；
m ── 试样的质量，g；
V 1 ── 试液的定容体积，mL；
V 2 ── 测定时吸取试液的体积，mL。
计算结果精确至小数点后第二位。 
9 允许差
同一样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的5.0％。

附录 A (标准的附录) 

β－果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及判定规则

A 1 技术指标
A 1.1 酶活力
β－果糖苷酶活力(U／mg) ≥ 100；
葡萄糖氧化酶活力(U／mg) ≥ 20；
过氧化物酶活力(U／mg) ≥ 50。
A 1.2 干扰酶
β－果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷酶、
半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
A 2 试验方法 
用微量移液管吸取0.50mL 蔗糖标准溶液(3.6)，置于10mL比色管中，加入100μg乳糖
(HG3－1000，分析纯)、100μg可溶性淀粉(HGB 3095，分析纯)和100μg纤维二糖(生化纯)，
再加入1.0mLβ－果糖苷酶试剂溶液(3.2.1)。以下按7.1步骤操作。测定吸光度后，在标准
曲线(7.1) 上查出对应的蔗糖含量，按下式计算蔗糖的回收率：
C
R ＝ ━━━━━━━ × 100
0.5 × 400

式中：R ── 蔗糖的回收率，％；
C ── 蔗糖的实测值，μg。
A3 判定规则
测得蔗糖的回收率，如在95％～105％范围内，则判定β －果糖苷酶、葡萄糖氧化酶
和过氧化物酶符合技术要求。

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国家技术监督局1996-04-10批准 1996-12-01实施