中华人民共和国进出口商品检验行业标准 中华人民共和国进出口商品检验行业标准

出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法 SN 0294?93
Method for the determination of diarrhetic
shellfish poison in shellfish for export
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1　主题内容与适用范围
本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的腹泻性贝类毒素检验方法。
本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的腹泻性贝类毒素的检验。
2　引用标准
GB 4789.26　罐头食品商业无菌的检验
ZB B50 001　出口水产品检验抽样方法
ZB B50 004　出口冷冻水产品解冻方法
3　检验批
同一检验批的商品应具有相同特征,如产地、规格等。
4　样品的保存
4.1　样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异。同时,还要有充分的个数。去壳贝
肉、带壳的或罐装的等,均应采取足够的个数并使贝肉达200 g以上。
4.2　远离实验室, 不能及时送检的样品, 除了在常温下品质不会发生变化的, 应将样品
置于合成树脂袋内冷冻送检, 如为带壳样品, 应按5.3的方法开壳,去除水分后冷冻送检。
5　样品的制备
5.1　生鲜带壳样品,用刀切开闭壳肌开壳取出贝肉。不得以加热及加药物的方法开壳。注
意不要破坏闭壳肌以外的组织,尤其是中肠腺(又称消化盲囊,组织呈暗绿色或褐绿色)。
将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属网上,控水5min,按5.4或5.5制备检样。
5.2　冷冻的带壳样品,使其在室温下呈半冷冻状态后,以前述方法开壳取肉,这时的贝
肉仍呈冷冻状态。经除去贝肉外部附着的冰片,轻轻抹去水分后,按5.4或5.5制备样品。
5.3　事先已去除水分的冷冻去壳贝肉,按5.4或5.5制备样品。
5.4　扇贝、贻贝、牡蛎等可以切取中肠腺的去壳贝肉,称量200 g贝肉重量后仔细切取全
部中肠腺,将中肠腺称重后细切混合做为检样。同时,注意不要使中肠腺内容物污染案
板。
5.5　对不便切取中肠腺的去壳贝肉样品,可将全部贝肉细切、混合、做为检样。
5.6　为避免毒素的危害,应戴手套进行检验操作。移液管等用过的器材应在5％的次氯
酸钠溶液中浸泡1h以上,以使毒素分解,同样,废弃的提取液等也应以上述溶液处理。
6　测定方法
6.1　方法提要
用丙酮提取贝类中毒素,再转移至乙醚中,经减压浓缩至干后,再以1％吐温60生理
盐水溶解残留物注射小白鼠观察存活情况,计算其毒力。
6.2　试剂和材料
6.2.1　丙酮(分析纯)。
6.2.2　乙醚(分析纯)。
6.2.3　1％吐温60生理盐水。
6.3　仪器和设备
6.3.1　旋转蒸发器。
6.3.2　均质器。
6.3.3　天平：感量0.1g。
6.3.4　刻度试管：15mL,具0.2mL刻度。
6.3.5　冰箱：0～5℃和-15～20℃。
6.3.6　注射器：1mL。
6.3.7　注射器针头：8#。
6.3.8　体重为16～20 g的健康ICR系雄性小白鼠。
6.4　测定步骤
6.4.1　提取
6.4.1.1　将检样置于均质杯内,加3倍量丙酮至少均质2min。如为小均质杯,可分两次操
作。
6.4.1.2 用布氏漏斗抽滤并收集提取液。
6.4.1.3　对残渣以检样两倍量丙酮再抽滤两次,合并抽滤液。
6.4.1.4　将抽提液移入旋转蒸发瓶内,减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。
6.4.1.5　将浓缩物移入分液漏斗内,以100～200 mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分,以不
生成乳浊液的程度轻轻振荡,静置分层后去除水层。
6.4.1.6　用相当乙醚半量的蒸馏水洗醚层两次,再将醚层移入300～500 mL的茄形瓶中,
减压浓缩去除乙醚。
6.4.1.7　以少量乙醚将浓缩物移入50或100 mL茄形瓶中,再次减压浓缩去除乙醚。
6.4.1.8 以1％吐温60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10 mL。按5.4条以中肠
腺做为检样的,此时1 mL液量相当于预先测定的20 g去壳贝肉的重量,对其他检祥,此时
1 mL液量也相当于20 g去壳贝肉的重量,以此悬浮液做为试验溶液。
6.4.1.9　如必要时,对试验溶液可做进一步稀释,稀释前,应先以振荡器使试液成均一
悬浮液,再取其部分以1％吐温60生理盐水稀释成4倍或16倍的试液。
6.4.2　小白鼠试验
6.4.2.1　以振荡器使试液或其稀释液成为均一的悬浮液。
6.4.2.2　分别将1mL试液注射到三只体重16～20g的健康ICR系雄性小白鼠腹腔中。
6.4.2.3　按上项方法,注射1％吐温60生理盐水,做为阴性对照。
6.4.2.4　观察自注射开始到24h后的小白鼠存活情况,求出一组三只中死亡两只以上的最
小注射量。
6.4.2.5　小白鼠注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼,大多呼吸异常,致死时间长(也
有24h以上的)。
6.5　结果计算和表述
6.5.1　毒力的计算
使体重16～20 g的小白鼠在24 h死亡的毒力为1个小白鼠单位(MU),实际小白鼠单位
的计算,按下表从一组三只中二只以上在24 h内死亡的最小注射量及最大稀释倍数进行计
算。
6.5.2　注射量与毒力的关系
注射量与毒力的关系
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试验液 ┃ 注射量 ┃ 检样量 1) ┃ 毒力
┃ mL ┃ g ┃ MU/g
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原液 ┃ 1.0 ┃ 20 ┃ 0.05
原液 ┃ 0.5 ┃ 10 ┃ 0.1
4倍稀释液 ┃ 1.0 ┃ 5 ┃ 0.2
4倍稀释液 ┃ 0.5 ┃ 2.5 ┃ 0.4
16倍稀释液 ┃ 1.0 ┃ 1.25 ┃ 0.8
16倍稀释液 ┃ 0.5 ┃ 0.625 ┃ 1.6
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注：1)以中肠腺为检样时,相当于含有中肠腺的去壳贝肉量。

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附加说明：
本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。
本标准由中华人民共和国辽宁进出口商品检验局负责起草。
本标准主要起草人唐守亭、王曦、秦城。
本标准等同采用日本厚生省1981年5月19日公布的方法。
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中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-12-28批准 1994-05-01实施