G.1.3 血滤液制备
精密量取15mL血样放入三角烧瓶中，依次加入蒸馏水75mL、 16.5%钨酸钠溶液6mL、 0.5mol/L H2SO4
7.5mL，用力振摇。待红细胞完全破坏后，使用定量滤纸进行过滤。取过滤后的上清液按表G.1测定。
G.1.4 甘油残留量测定
按表G.1进行测定
表G.1 甘油残留量测定
试剂 空白 样品 备注
过滤后上清液（血滤液） 15 精密量取
蒸馏水 100.0mL 100.0mL
0.1%溴甲酚紫溶液 2 滴 2 滴
0.1mol/L NaOH 溶液 滴定至蓝色
14%过碘酸钠 10.0mL 10.0mL 精密量取
38℃±1℃恒温 15min
0.1%溴甲酚紫溶液 2 滴 2 滴
0.1mol/L NaOH 溶液 滴定至蓝色
G.1.5 计算WS/T 550—2017
16
按G.1式计算甘油含量。
1000
15
103.5
V
0.1
C
V V 0.00921
3
NaOH
P （ 1 2） .................. (G.1)
式中：
P ——甘油含量，单位为克每升（ g/L） ;
V1 ——试验全程样品消耗NaOH的体积，单位为毫升（ mL）；
V2 ——试验全程空白消耗NaOH的体积，单位为毫升（ mL）；
0.00921 ——换算系数， 0.1mol/L NaOH溶液相当于0.00921g甘油；
CNaOH ——滴定NaOH浓度，单位为摩尔每升（ mol/L）；
0.1 ——NaOH溶液浓度校正因子；
V3 ——血滤液的体积，单位为毫升（ mL）；
103.5 ——制备血滤液的所有血样和试剂的体积总量，单位为毫升（ mL）；
15 ——精密量取的血样体积，单位为毫升（ mL）；
1000 ——体积换算系数。
G.2 渗透压测定法
正常血清渗克分子浓度为 289mmol（ 289mOsm），甘油含量为 1%（ 10g/L）质量浓度时，其渗克分
子浓度为 420mmol（ 420mOsm），因此渗透压测定法可作为一种检测去甘油红细胞甘油残存量的参考方
法，操作方法应参照渗透压仪器生产厂家使用说明书。
G.3 折射仪测定法
使用折射仪是测定渗克分子浓度的一种筛选方法。折射仪读数到28（如折射仪型号为10401，折射
指数或比重<1.3384T.S.）与甘油水平不高于1%（ 10g/L）相关。折射仪测定法可作为一种检测甘油含量
的参考方法。方法参见生产厂家使用说明书。
G.4 GPO-PAP法
G.4.1 试剂
20%三氯醋酸溶液：称取20克三氯醋酸，用适量蒸馏水溶解，再加蒸馏水稀释至100mL。
G.4.2 样品处理
吸取血液1mL于试管中，加20%三氯醋酸溶液1mL，沉淀10分钟（破坏红细胞并使血红蛋白沉淀）。
于3500r/min离心5min，取上清液。按GPO-PAP法试剂盒说明书操作。
G.4.3 计算
按G.2式计算甘油含量
C 2 92.09 1000
A A
1 0
P ............................. (G.2)WS/T 550—2017
17
式中：
P ——甘油含量，单位为克每升（ g/L）；
A1 ——样品吸光度；
A0 ——标准品吸光度；
C ——标准品浓度，单位为毫摩尔每升（ mmol/L）；
2 ——样品稀释倍数；
92.09 ——甘油分子量；
1000 ——体积换算系数。
G.5 其他
可使用其他经验证可使用的方法进行甘油残留量的检测。WS/T 550—2017
18
GG
附 录 H
（ 规范性附录）
亚甲蓝残留量检测方法
H.1 试验仪器、试剂
H.1.1 试验仪器
固相提取柱1)、配套固相提取装置、分光光度计、离心机。
H.1.2 试剂
亚甲蓝标准品、甲醇、乙酸。
H.2 操作步骤
H.2.1 标准品配制与制备
H.2.1.1 亚甲蓝标准浓缩储备液配制
精密称取亚甲蓝对照品粉末38.0mg，用蒸馏水溶解并稀释至100mL，配制成1.0mmol/L的亚甲蓝标准
浓缩储备液，避光保存。
H.2.1.2 标准品制备
精密量取1.0mmol/L亚甲蓝标准浓缩储备液50μL，置50mL容量瓶中，用血浆稀释至刻度，配成亚甲
蓝浓度为1.0μmol/L的亚甲蓝标准品。取3mL Waters Oasis小柱，置于固相提取装置上，取6mL甲醇活
化，加入6mL标准品，提取亚甲蓝；用30%甲醇6mL清洗，随后用含1％乙酸的甲醇溶液6mL洗脱，于3500rpm
离心洗脱液10min，取上清液作为标准品溶液。
H.2.2 样品制备
取 3mL Waters Oasis 小柱，置于固相提取装置上，取 6mL 甲醇活化，加入 6mL 供试血浆，提取亚
甲蓝；用 30%甲醇 6mL 清洗，随后用含 1％乙酸的甲醇溶液 2mL 洗脱（样品浓缩 3 倍），于 3500rpm
离心洗脱液 10min，取上清液作为样品溶液。
H.2.3 测定
用含1%乙酸的甲醇溶液做试剂空白，在654nm±2nm处测定吸光度。亚甲蓝残留量的计算参见式H.1。
320 0.1
WP 1 DWR
A
A 3
0
1
（ ）
X ............................ (H.1)
式中：
X ——血浆中亚甲蓝残留量，单位为微摩尔/升（ µmol/L） ;
1) 本标准起草者使用 Waters Oasis 小柱。本标准中提及的具体的公司或制造商的产品，不代表本标准起草者认
为其优于其他同类未提及的产品而对其进行支持和推荐。WS/T 550—2017
19
A1 ——样品吸光度；
3 ——样品浓缩倍数；
A0 ——标准品吸光度；
W ——亚甲蓝标准品质量，单位为毫克（ mg）；
P ——亚甲蓝标准品纯度，单位为%；
DWR ——亚甲蓝标准品干燥失重，单位为%；
320 ——亚甲蓝分子量；
0.1 ——体积换算系数。
H.3 其他
可使用其他经验证可使用的方法进行亚甲蓝残留量的检测。
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